單核巨噬細(xì)胞是人體內(nèi)重要的免疫細(xì)胞，在抵御病原體、清除細(xì)胞碎片和組織修復(fù)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。小鼠單核巨噬細(xì)胞的研究在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中被廣泛運(yùn)用，包括疾病模型的建立、藥物篩選以及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究等。然而，由于單核巨噬細(xì)胞的稀缺性和短暫的生命周期，如何有效地保存這些細(xì)胞就成為了研究者們關(guān)注的焦點(diǎn)。

　　

　　1、主要試劑與儀器

　　

　　主要試劑包括DMEM培養(yǎng)基、FBS、DMSO、青霉素-鏈霉素溶液等。儀器包括細(xì)胞培養(yǎng)箱、低溫冰箱、離心機(jī)、細(xì)胞計(jì)數(shù)板等。

　　

　　2、小鼠單核巨噬細(xì)胞凍存步驟

　　

　?。?）單核巨噬細(xì)胞的分離與純化：采用頸部淋巴結(jié)或腹腔穿刺法收集單核巨噬細(xì)胞，通過密度梯度離心法進(jìn)行純化。

　　

　?。?）細(xì)胞凍存液的準(zhǔn)備：將DMEM培養(yǎng)基與FBS按照一定比例混合，加入適量DMSO，使其終濃度為5%。

　　

　?。?）細(xì)胞凍存：將純化的單核巨噬細(xì)胞用凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為5×10^6個/ml，迅速轉(zhuǎn)移至凍存管中。

　　

　　（4）凍存與復(fù)蘇：將凍存管放入-80℃冰箱中，48小時后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。細(xì)胞復(fù)蘇時，從液氮中取出凍存管，迅速轉(zhuǎn)移至37℃水浴中解凍。

　　

　　這種高效、簡便的小鼠單核巨噬細(xì)胞凍存方法通過優(yōu)化凍存液組成、細(xì)胞密度以及凍存與復(fù)蘇過程，顯著提高了細(xì)胞的存活率和活性。這將為廣大研究者提供一種可靠的實(shí)驗(yàn)手段，有助于單核巨噬細(xì)胞在免疫學(xué)、藥理學(xué)和疾病模型研究中的應(yīng)用。