大鼠海馬神經元細胞取自新鮮的組織,按照標準操作流程分離培養(yǎng),*培養(yǎng)基能提供細胞理想的生長條件,降低雜細胞污染,保證不同批次間細胞質量的穩(wěn)定,所提供的原代細胞均需經過細胞類型特異性標記物、細胞形態(tài)學等檢測,保證細胞純度在90%以上;同時也需經過微生物檢測,保證不含有HIV、HBV、HCV、支原體、真菌及其他類型的細菌。
海馬椎體神經元是海馬區(qū)的主要成分,主要功能是參與近期記憶、情緒及內臟功能調節(jié)、是老年性癡呆等疾病的主要病灶之一。海馬神經元細胞培養(yǎng)是研究神經細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型,其在神經生物學,發(fā)育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用。大鼠海馬神經元細胞采用胰酶消化制備而來,細胞總量約為5×105個/瓶,細胞純度可達80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
收到大鼠海馬神經元細胞請按照以下方法進行操作。
1、取出細胞瓶,75%酒精消毒后拆下封口膜,放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2、海馬神經元細胞為終末分化的細胞,建議直接使用,不建議擴大培養(yǎng)。
3、待細胞狀態(tài)最佳時準備轉孔培養(yǎng),進行實驗:
(1)吸出細胞瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
?。?)加入0.125%的胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃消化1min左右;顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化。
?。?)用吸管輕輕吹打混勻,按適當的比例進行轉孔培養(yǎng)實驗,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(4)待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察,每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。