細胞培養(yǎng)基不僅為細胞提供必要的營養(yǎng)物質(zhì),還為細胞的生長和繁殖提供適宜的環(huán)境。在細胞培養(yǎng)的過程中,選擇合適的培養(yǎng)基是養(yǎng)好細胞的第一步。
本期細胞學堂將為大家詳細介紹一些特殊的培養(yǎng)基,以及選用時的相關指標,幫助您快速上手選擇合適的培養(yǎng)基,以滿足不同實驗需求。
常見細胞培養(yǎng)基可分為基礎培養(yǎng)基、完-全培養(yǎng)基和無血清細胞培養(yǎng)基三類。
在去年發(fā)布的干貨中,我們詳細介紹了關于MEM、DMEM、RPMI 1640、無血清培養(yǎng)基等常見培養(yǎng)基,感興趣的可以回顧下。
基礎培養(yǎng)基主要是指未添加血清的合成培養(yǎng)基以及一些專為特定原代細胞設計的專用基礎培養(yǎng)基。
無血清培養(yǎng)基是指通過添加已知成分的組分(如轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白、胰島素等)替代血清,用于特定細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
完-全培養(yǎng)基是指在基礎培養(yǎng)基的基礎上添加了血清的培養(yǎng)基,可能還含有一些特殊的細胞生長因子、抗生素(如雙抗)等。
特殊細胞培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基,通常需要搭配血清或者血清替代物來配制成完-全培養(yǎng)基后使用。
由Glen Fischer在美國國家癌癥研究所設計研制,最初用于小鼠白血病細胞的培養(yǎng),現(xiàn)主要用于造血細胞的培養(yǎng),如淋巴母細胞和淋巴細胞的培養(yǎng)。
該培養(yǎng)基含有多種細胞生長所需的氨基酸、維生素以及無機鹽等成分,不含蛋白質(zhì)、脂類或任何外源性生長因子。
由William和Gunn共同研制,主要用于大鼠肝上皮細胞的培養(yǎng),也可用于其他哺乳動物的肝細胞培養(yǎng)。
該培養(yǎng)基含有多種細胞生長所需的氨基酸、維生素以及無機鹽等成分,不含蛋白質(zhì)、脂類或任何外源性生長因子,可以根據(jù)研究需要來調(diào)整L-谷氨酰胺的用量,在使用時添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細胞的生長與增殖。
MCDB是為特定細胞設計的低蛋白和無血清培養(yǎng)的培養(yǎng)基,MCDB 131是MCDB培養(yǎng)基的一種,是由Knedler和Ham設計開發(fā)出來的,最初用于培養(yǎng)人微血管內(nèi)皮細胞(HMVEC)。隨著深入的研究,MCDB 131培養(yǎng)基除用于內(nèi)皮細胞外,還可用于包括肝細胞、平滑肌細胞、心肌細胞在內(nèi)的多種細胞類型。
MCDB 131培養(yǎng)基不同于傳統(tǒng)培養(yǎng)基之處在于,其含有微量元素、腐胺、腺嘌呤、胸腺嘧啶以及更高濃度的氨基酸和維生素。該培養(yǎng)基在使用時常與表皮生長因子(EGF)、氫化可的松、谷氨酰胺以及低濃度血清搭配使用,血清的添加濃度需根據(jù)細胞類型而定。
Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基,是一種經(jīng)過改良的最-低必需培養(yǎng)基,可以在減少50%常規(guī)血清用量的情況下,維持細胞的正常增殖。這一特性使其在細胞轉(zhuǎn)染等實驗操作中尤為適用。
01
糖的濃度
高糖培養(yǎng)基通常適合高代謝率及高密度細胞的培養(yǎng)。
02
酚紅
酚紅是一種酸堿指示劑,用于輔助判斷試劑的pH值變化。酸性環(huán)境下偏黃色,堿性環(huán)境下偏紫色。
03
GlutaMAX
L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,是L-谷氨酰胺的升級版本。L-谷氨酰胺在溶液中容易降解,但L-丙氨酰-L-谷氨酰胺具有良好的穩(wěn)定性,可以作為L-谷氨酰胺的替代物。
04
鈣、鎂離子
鈣、鎂離子在細胞培養(yǎng)中有助于細胞彼此相連,增強細胞的黏附性,培養(yǎng)懸浮細胞可選擇無鈣鎂離子的培養(yǎng)基。
以上是關特殊細胞培養(yǎng)基及選用指標的介紹,更多細胞培養(yǎng)相關干貨,請持續(xù)關注細胞學堂專欄~